Fin du XIXe siècle, Steel Ball Run est le nom d'une course de chevaux qui a lieu, aux États-Unis, de San Diego à New York, ce qui représente plus de 6 000 km à parcourir pour nos cavaliers.
Mais la récompense s'avère à la hauteur : 50 000 000 $.
Les participants viennent de tous les horizons : Angleterre, Égypte, Mongolie... et ont tous leurs propre motivation : jeune jockey en quête de gloire, fils d'esclave noir voulant racheter la ferme, ou jeune Indien qui veut récupérer sa terre face à l'envahisseur blanc...
Mais Gyro Zeppeli semble y être pour des raisons bien plus mystérieuses et, armé d'étranges sphères d'acier, il promet d'être un adversaire coriace.
Sa seule présence arrivera à redonner goût à la vie au jeune handicapé Johnny Joestar. Impressionné par ce personnage hors du commun, il trouvera la force de sortir de son fauteuil roulant et franchira ainsi son premier pas vers sa vie d'adulte.
Johnny Joestar (ジョニィ・ジョースター, Jonyi Jōsutā)
Nom du cheval : Slow Dancer
Nom du Stand : Tusk
Il est le principal protagoniste de l'histoire, avec Jayro Zeppeli. Il est un prodige des courses de chevaux, mais lorsqu'il avait 17 ans, il eut un accident qui le rendit paraplégique.
Il participe à la Steel Ball Run afin d'en savoir plus sur Jayro et de connaître la technique de la Rotation.
Face à Pork Pie Hat Boy, un terroriste, il développera son Stand Tusk qui lui permet de tirer sur ses ennemis grâce à ses ongles.
Jayro Zeppeli (ジャイロ・ツェペリ, Jairo Tseperi)
Nom du cheval : Valkyrie
Nom du Stand : Ball Breaker
Il est le second protagoniste de l'histoire, avec Johnny Joestar.
Il est originaire du royaume de Naples, en Italie où il exerce le métier de bourreau, hérité de son père.
Il participe à la Steel Ball Run afin de faire libérer un garçon, Marco, qu'il croit être emprisonné à tort.
Il est armé de deux boules en fer qu'il peut faire tourner très vite grâce à la Rotation, pour en faire des armes redoutables.
Il est aussi appelé Gyro Zeppeli.
Diego "Dio" Brando (ディエゴ・ブランドー, Diego Burandō)
Nom du cheval : Silver Bullet
Nom du Stand : Scary Monsters
Participant Anglais, il est d'abord présenté comme un rival de Jayro et Johnny.
Après avoir été soumis au Stand du professeur Ferdinand, il acquiert l'œil gauche du Saint ainsi que son Stand Scary Monster (devenant Scary Monsters).
Ce dernier lui permet de se transformer en dinosaure à volonté ainsi que de transformer d'autres personnes en dinosaures ou de les fossiliser.
Lucy Steel (ルーシー・スティール, Rūshī Sutīru)
Âgée de 14 ans, elle est la femme de Stephen Steel. Elle essaie d'aider Jayro et Johnny pendant la course.
Funny Valentine (ファニー・ヴァレンタイン, Fanī Varentain)
Nom du Stand : D4C (Dirty Deeds Done Dirt Cheap)
Il s'agit du 23e Président des États-Unis (dans Steel Ball Run). Son objectif est de collecter tous les morceaux du corps du Saint afin de faire prospérer sa nation, et ce quel qu'en soit le prix. C'est l'antagoniste principal de la partie. Il est tué par Johnny.